EVO视讯的赭曲霉毒素检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）

1. 原理及用途

赭曲霉毒素是一种由曲霉菌属和青霉菌属某些种类产生的二级代谢产物，其中赭曲霉毒素A在自然界中的分布最广，毒性最大，对人类以及动植物造成显著影响。该试剂盒采用间接竞争ELISA方法，能够高效检测米面、花生、大豆等谷物及饲料样本中的赭曲霉毒素（Ochratoxins A，OTA）。试剂盒包含预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其它配套试剂。

2. 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：1 ppb (ng/ml)；

2.2 反应模式：37℃，30分钟；

2.3 检测下限：谷物 5 ppb，饲料 10 ppb；

2.4 交叉反应率：赭曲霉毒素A 100%；

2.5 样本回收率：谷物及配合饲料 85% ± 15%。

3. 试剂盒组成

酶标板（96孔）、标准品（黑盖）各1ml：0 ppb、1 ppb、3 ppb、9 ppb、27 ppb、81 ppb；酶标记物（红盖）11 ml；抗体工作液（蓝盖）55 ml；底物液A（白盖）6 ml；底物液B（黑盖）6 ml；终止液（黄盖）6 ml；20×浓缩洗涤液（白盖）40 ml；说明书1份；盖板膜1张；自封袋1个。

4. 需要的器材和试剂

4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）；

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl，多道300µl。

5. 样本前处理

5.1 样本处理前须知：确保实验器具洁净，使用一次性吸头以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液步骤：液体1：70%甲醇，V甲醇:V水=7:3；液体2：1 M碳酸氢钠溶液（42g碳酸氢钠，加入去离子水混匀，定容至500ml）；液体3：工作洗涤液（稀释20倍）。

5.3 样本前处理步骤

531 食品类谷物、大豆类样本处理方法：称取4g样品于50ml离心管中，加入10ml 70%甲醇，振荡5分钟，室温4000 rpm离心10分钟；取1ml上清，加入1ml 1 M碳酸氢钠溶液，振荡后取50µl进行分析。样本稀释倍数：5；检测下限：5 ppb。

532 饲料处理方法：称取2g样品于50ml离心管中，加入10ml 70%甲醇，振荡5分钟，室温4000 rpm离心10分钟；取1ml上清，加入1ml 1 M碳酸氢钠溶液，振荡后取50µl进行分析。样本稀释倍数：10；检测下限：10 ppb。

取所需试剂置于室温平衡30分钟，洗涤液如有结晶需恢复室温。将微孔板及框架取出，其余微孔板放入自封袋中保存于2-8℃。每个样本和标准品做2孔平行，并记录各自位置。加样时，每孔加入标准品或样本50µl及抗体工作液50µl，轻轻振荡后在37℃避光反应30分钟。随后洗涤、加酶反应、显色及终止反应步骤依次进行。

7.1 百分吸光率的计算：标准液或样本的百分吸光率为标准液或样本的平均吸光度值（双孔）除以第一个标准液（0 ppb）的吸光度值，再乘以100%。

7.2 标准曲线的绘制与计算：以标准液百分吸光率为纵坐标，借助标准曲线预测样本浓度。如需快速分析班样品，建议使用EVO视讯的专业分析软件。

注意：环境温度低于25℃或试剂及样本未回到室温将导致OD值偏低；洗板时要确保操作快速、彻底；孵育过程中应用盖板膜封住微孔板以避免光照；不要使用过期的试剂盒；显色液如变色应立即弃用；终止液有腐蚀性，应避免皮肤接触。

试剂盒储藏于2-8℃，避免冷冻。该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。