培养细胞的条件对于生物医学研究至关重要。在本实验中，细胞培养采用了以下标准条件：

培养条件

气相组成：95%空气 + 5%二氧化碳，温度设定为37℃。

背景介绍

人黑色素瘤细胞株A375（STR）源自一位54岁女性黑色素瘤患者的淋巴结转移灶。该细胞株展现出上皮样形态，且在体外培养过程中呈现贴壁生长。这使得A375细胞株成为研究黑色素瘤的基础工具，涉及到肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移机制，以及抗黑色素瘤药物的筛选与研发等方面。

传代方法

首次传代建议比例为1:2。在细胞培养的过程中，每两天更换一次培养液，以维持细胞的良好状态。

细胞处理与观察

收到细胞后，请勿立即打开瓶盖，首先核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订单一致，并检查瓶身是否存在损坏或漏液等异常情况。如果未发现异常，可在显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

细胞传代步骤

贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞脱落情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速添加5ml以上培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使之完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM的速度离心5分钟，弃去上清液，重悬入1-2ml完全培养基。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞的传代步骤如下：

1. 使用半换液法处理，竖着放置培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉3ml培养基后补充3ml完全培养基。
2. 如细胞生长情况不佳，请进行离心换液法，将细胞悬液收集到离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬，再按1:2比例分到新培养瓶中。

细胞冻存及复苏

EVO视讯提供标准的细胞冻存流程：当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗，并添加0.25%胰蛋白酶消化液进行处理，最后重悬于无血清冻存液后进行冷冻。复苏时，快速将冻存管置于37℃水浴解冻，并用75%酒精消毒，随后重悬于完全培养基中继续培养。

注意事项

运输过程中，细胞可能因贴壁不牢而脱落，属于正常现象。如细胞在运输过程中脱落较多，请按上述方法处理，确保细胞存活与健康，保证实验的顺利进行。

问题处理与重发政策

针对细胞出现问题的情况，EVO视讯提供详细的重发政策，确保客户的合理需求得到满足。若因运输、污染等问题导致细胞状态不良，客户需在规定时间内提供实验结果以便核实。如因客户操作不当导致的问题，EVO视讯将视具体情况而定。